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PCR擴(kuò)增試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)的幾大事項(xiàng)說明

瀏覽次數(shù):1157發(fā)布日期:2020-10-21
   PCR擴(kuò)增試劑盒提供DNA擴(kuò)增所需要的基本試劑。DNA擴(kuò)增時(shí),用戶需要自行準(zhǔn)備模板和擴(kuò)增所需要的引物。高溫嗜熱Pfu DNA聚合酶主要用于對保真度要求非常高的DNA擴(kuò)增,這些擴(kuò)增要求擴(kuò)增的產(chǎn)物中不能出現(xiàn)突變等錯(cuò)誤。
  PCR擴(kuò)增試劑盒實(shí)驗(yàn)事項(xiàng):
  1.樣本上PCR平臺(tái)可做的樣本包括血液,唾液,口腔拭子,在實(shí)驗(yàn)中,對于DNA投入量要求不是很高,根據(jù)不同項(xiàng)目需求,DNA投入量的范圍在100pg到100ng之間。
  2.進(jìn)行PCR反應(yīng)前,可以將所有g(shù)DNA的濃度稀釋到同一濃度,并轉(zhuǎn)移到PCR8聯(lián)管中,一方面是便于排槍操作,另一方面是加入相同起始量的gDNA,這樣可以降低終文庫的濃度差異,便于混合文庫。
  3.大多數(shù)情況下引物是1管,操作相當(dāng)方便;當(dāng)目標(biāo)區(qū)域是外顯子或者是其他連續(xù)區(qū)域時(shí),把引物分裝為2管,需要第二輪PCR前把產(chǎn)物合并,再進(jìn)行下一步反應(yīng)。
  4.執(zhí)行多重PCR反應(yīng)時(shí),特別是樣本量多的情況下,可以將T1設(shè)為一組,T2設(shè)為一組,便于制備反應(yīng)試劑混合液和排槍操作;并把解凍好的試劑放置在冰盒上,在冰盒上進(jìn)行加樣操作。
  5.實(shí)驗(yàn)中,可以在PCR管壁上和管蓋上同時(shí)進(jìn)行反應(yīng)編號(hào)標(biāo)記,防止高溫或其他原因?qū)е掠浱?hào)消失,避免后續(xù)產(chǎn)物混合操作失誤,造成樣本交叉污染。
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